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          喹乙醇检测试剂盒酶联免疫试验步骤

          日期:2019-05-25浏览:59次

             喹乙醇检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测组织、饲料等样本中的喹乙醇,试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时,加入标准品或样品溶液,样本中的喹乙醇和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗喹乙醇抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光度值与其所含喹乙醇含量成负相关,与标准曲线比较即可得出样本中喹乙醇的残留量。
            喹乙醇检测试剂盒酶联免疫试验步骤
            将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
            实验开始前,用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
            1、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
            2、加样反应:加标准品或样本50?l/孔到各自的微孔中,然后加抗体工作液50?l/孔,轻轻振荡5秒混匀,37℃避光反应30分钟。
            3、洗涤:将孔内液体甩干,用工作洗涤液250?l/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,zui后用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
            4、加酶反应:加酶标记物100?l/孔,37℃避光反应30分钟。
            5、洗涤:同上
            6、显色:加底物液A50?l/孔,再加底物液B50?l/孔,轻轻振荡5秒混匀,37℃避光显色15分钟。
            7、终止:加终止液50?l/孔,轻轻振荡混匀,终止反应。
            8、测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。
            喹乙醇检测试剂盒注意事项
            1、室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温(25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
            2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
            3、在所有孵育过程中,用盖板膜封住微孔板,避免光线照射。
            4、混合要均匀,洗板要彻底,在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性。
            5、不要使用过了有效期的试剂盒,不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
            6、显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。
            7、反应终止液有腐蚀性,避免接触皮肤。

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